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以下文章來源于技爾上海 ，作者技爾GL Sciences
您是否經(jīng)歷過分析寡核苷酸、蛋白等生物樣品時出現(xiàn)吸附拖尾嚴(yán)重，進(jìn)而導(dǎo)致檢測靈敏度低、重現(xiàn)性不好等問題? ProteoSil生物用液相色譜柱[柱」您一臂之力!
隨著生物醫(yī)藥行業(yè)的高速發(fā)展，各個生物藥細(xì)分領(lǐng)域的質(zhì)量控制也日趨完善。GL Sciences緊跟行業(yè)發(fā)展腳步，研發(fā)了ProteoSil系列生物用液相色譜柱，可應(yīng)用于核酸、寡核苷酸、肽段、蛋白、單克隆抗體、疫苗等分析物。
下文將為您詳細(xì)介紹這款新品，同時也會為大家分享幾個應(yīng)用案例。
一、產(chǎn)品特點
通常含有磷酸基團及金屬配位的化合物較易與不銹鋼表面的金屬離子產(chǎn)生吸附。金屬吸附會對峰形、檢測靈敏度和重現(xiàn)性產(chǎn)生負(fù)面影響，并降低定量分析的性能。
雖然可以通過重復(fù)注入高濃度樣品來抑制吸附，但這種方法既費時又昂貴。另一種方式是使用含有螯合劑的溶液來抑制吸附，但是此方法不適用于LC-MS分析，因為它可能導(dǎo)致污染和靈敏度降低。所以在做生物分析時建議選擇PEEK材質(zhì)的色譜柱。
ProteoSil系列色譜柱除了有PEEK材質(zhì)外，其不銹鋼(SUS)材質(zhì)也進(jìn)行了InertMask惰性化處理技術(shù)。這是一種表面失活的功能薄膜處理技術(shù)。基于該涂覆技術(shù)，在不銹鋼管內(nèi)壁金屬部件上進(jìn)行均勻涂覆，使金屬表面覆蓋了一層高彈性的玻璃薄膜。因此不銹鋼(SUS)材質(zhì)的色譜柱一定程度上也可以穩(wěn)定地分析高金屬吸附性化合物(如胺類等)。
ProteoSil有常規(guī)100 Å，200 Å，300 Å的規(guī)格，對填料的硅膠孔徑大小進(jìn)行精確控制，使其滿足生物分析的多樣化選擇。具體而言，如200Å孔徑適合于分析分子量范圍從幾千Da到幾萬Da的化合物，為多肽和寡核苷酸的分析提供較佳性能。
*填料孔徑和適合分析物分子量的范圍：
ProteoSil擁有多種固定相可選。常規(guī)反相模式有C18,C8,C4，HILIC模式有烷基酰胺基，體積尺寸排阻模式有DIOL固定相可供選擇。
ProteoSil擁有不銹鋼，PEEK，PEEK內(nèi)襯不銹鋼( 在使用UHPLC時能夠增強色譜柱的耐壓性)三種材質(zhì)。
除了官能團化學(xué)修飾和封端處理，GL Sciences是自主獨立生產(chǎn)合成硅膠填料的廠商之一，生產(chǎn)的色譜柱具有良好的批次重現(xiàn)性。
二、應(yīng)用案例
案例一：寡核苷酸的分析
分析條件：
色譜柱: ProteoSil 200-C18(3μm, 100x3.0mm I.D.)
流動相:
A) 5mM TEAA in H2O(pH6.5)/CH3CN=80/20,v/v
B) 5mM TEAA in H2O(pH6.5)
A/B=5/95-(60min)-50/50,v/v .
流速: 0.8mL/min
柱溫: 40°C
檢測器: UV 260nm
樣品:
1.CATGACGTTCCTGATGCT(18mer,M.W.5465.61)
2.CCATGACGTTCCTGATGCT(19mer,M.W.5754.79)
3.TCCATGACGTTCCTGATGCT(20mer, M.W.6058.99)
案例二：肽和蛋白質(zhì)的分析
分析條件：
色譜柱: ProteoSil 300-C18(5μm,150x4.6mm I.D.)
流動相:
A) 0.05% TFA in (CH3CN/H2O=90/10,v/v)
B) 0.05% TFA in H20
A/B =20/80-40min-40/60,v/v
流速: 1.0mL/min
柱溫: 30°C
檢測器: UV 280nm
進(jìn)樣量: 20μL
樣品:
1.催產(chǎn)素0.05mg/mL
2.蛋氨酸腦啡肽0.11mg/mL
3.亮氨酸腦啡肽0.11mg/mL 4.血管緊張素Ⅱ 0.05mg/mL 5.血管緊張素Ⅰ 0.16 mg/mL
6.胰島素0.05mg/mL
7.胰島素B鏈0.10mg/mL
保護柱安裝在進(jìn)樣口和分析柱之間，主要用于保護分析柱。有3種不同類型可供選擇。
總結(jié)：針對生物制藥及其他易吸附的金屬配位物，建議選擇ProteoSil生物用液相色譜進(jìn)行分析。歡迎各位老師試用！
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